使用酶标仪检测钙离子的方法
作者：admin 时间：2021-05-20 03:11:32 点击次数:1150
使用酶标仪检测钙离子的方法，目前使用酶标仪主要通过两种方式检测钙离子通路:
1、荧光方法。化合物与细胞膜上的离子通道结合后，离子通道的状态发生改变，通道被打开，钙离子进入细胞。进入细胞后，与细胞内的钙离子荧光指示剂结合，发出荧光并被酶标仪捕获。荧光强度与进入细胞的钙离子含量成正比。荧光指示剂大多是FLuo3。Fluo3-AM是乙酰甲酯的衍生物，可以穿透细胞膜进入细胞。进入细胞后，被细胞内酯酶切成氟，留在细胞内。钙离子进入细胞后与它结合，它发出强烈的荧光。
2、发光的方法。Aequorin复合物(Aequorin)由22kDa Aequorin (Apoaequorin protein)、分子氧和底物coelenterazine组成。只有钙离子(Ca2+)与复合物结合时，coelenterazine才能被氧化产生高❀能产物Coelenteramide，同时释放CO2和蓝色荧光(-466 nm)。正是这种Ca2+依赖的反应过程使得coelenterazine非常适合监测活细胞中的钙离子水平。与传统的荧光钙离子指示剂相比，它具有以下优点:1)可检测范围广泛的钙离子浓度-从0.1 μM到>100 μM;2)样品无自身荧光，背景荧光比使用荧光钙离子指示剂低:虽然信号比使用荧光钙离子指示剂弱，但通过成像仪器可以获得较高的信噪比，因此具有较高的灵敏度。3)丙泊林复合物可以稳定地维持在细胞内，使其能够监测钙离子数小时至数天。
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